【摘 要】
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目的通过小鼠甲胎蛋白(AFP)与结核分枝杆菌热休克蛋白70(HSP70)基因融合制备DNA疫苗,研究该种DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答及其对荷瘤小鼠的治疗作用。方法应用分子克隆技术构
【机 构】
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哈尔滨医科大学附属第一医院感染科,哈尔滨医科大学附属第一医院感染科,重庆医科大学病毒性肝炎研究所,重庆医科大学病毒性肝炎研究所,重庆医科大学病毒性肝炎研究所,
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目的通过小鼠甲胎蛋白(AFP)与结核分枝杆菌热休克蛋白70(HSP70)基因融合制备DNA疫苗,研究该种DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答及其对荷瘤小鼠的治疗作用。方法应用分子克隆技术构建AFP与HSP70的融合表达载体,免疫实验共分5组:磷酸盐缓冲液组、pcDNA3．1组、pcDNA3.1-AFP组、pcDNA3．1-HSP70组、pcDNA3．1- AFP-HSP70组(融合疫苗组),每组7只小鼠。2次免疫后分离小鼠脾细胞,体外诱导细胞毒性T淋巴细胞做杀伤实验, 以乳酸脱氢酶法检测杀伤率,以酶联免疫吸附法检测脾细胞释放的干扰素γ;体外培养小鼠肝癌细胞系Hepa1-6,以每200 μl 4×106细胞数在C57BL／6J小鼠右前腋皮下注射作荷瘤鼠模型,以融合疫苗免疫荷瘤鼠,观测肿瘤大小评价融合疫苗的治疗作用。结果AFP与HSP70的融合疫苗能诱导AFP特异性细胞毒性T淋巴细胞反应,HSP70对于该反应有增强作用(P<0．05),杀伤率在效:靶比为50:1时为32％左右;免疫后小鼠脾细胞体外刺激后分泌干扰素γ约200 pg／ml,融合疫苗组分泌高于其他组(P<0．05),融合疫苗组肿瘤小于其他组(P<0．05),生存时间长于其他组(P<0．05)。结论 AFP与HSP70的融合疫苗能激发AFP特异性细胞毒性T淋巴细胞．并且对肝癌移植瘤有治疗作用。
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