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为筛选出日本脑炎病毒（JEV）敏感度高的BHK-21细胞株，采用终点稀释法从母代BHK-21混合细胞中分离单细胞克隆株，应用接种BHK-21克隆株方法，从JEV阳性蚊子样品研磨液中分离病毒，筛选出的3号单细胞克隆株经3次传代后细胞产生明显病变，分离到1株JEV，5号单克隆株培养物核酸检测呈阳性，但是不产生细胞病变，母代混合细胞没有病变，JEV核酸检测阴性。根据1、3型JEV的prM与E基因设计4对引物初步鉴定分离株基因型，鉴定分离株为1型JEV。综合以上结果，构建的BHK-21单细胞克隆株比BHK-21混