【摘 要】
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目的探讨促红细胞生成素(EPO)抑制氧化损伤导致的Müller凋亡的可能性及其分子机制。方法对培养的人眼Müller细胞系MIO-M1细胞采用Brd U标记法和MTT比色法观察正常及过氧化
【机 构】
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胜利油田中心医院眼科; 温州医科大学附属眼视光医院; 上海交通大学医学院附属新华医院;
【基金项目】
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国家自然科学基金(81100677);国家自然科学基金(面上项目)(81371040);上海市青年科技启明星计划(12QA1402200)
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目的探讨促红细胞生成素(EPO)抑制氧化损伤导致的Müller凋亡的可能性及其分子机制。方法对培养的人眼Müller细胞系MIO-M1细胞采用Brd U标记法和MTT比色法观察正常及过氧化氢(H2O2)或葡萄糖氧化酶(GO)氧化损伤条件下0、0.01、0.1、1、10、30、100 U/m L EPO作用24、48、72 h后对Müller细胞增殖、迁移的影响;采用MTT比色法观察加PI3K/PDK1/PKB(Akt)信号传导通路阻断剂LY294002后Müller细胞增殖的变化;采用ELISA实验观察Müller细胞对EPO的表达和分泌;通过Western-blotting技术检测体外不同条件培养下EPO对ERK1/2及Akt信号传导通路的作用。结果正常培养条件下,EPO有轻度促进Müller细胞增殖迁移的作用,但差异无统计学意义;正常培养条件下,Müller细胞自身不分泌EPO,0.4 mmol/L H2O2致Müller细胞损伤80%时,其培养液内EPO的表达量为正常培养液下的1.42倍;氧化损伤状态下,0.08 mmol/L H2O2或8 U/L GO作用Müller细胞24 h后导致其半数死亡且Akt信号通路激活;提前2 h加入外源性EPO后,发现30 U/m L EPO对抗氧化所致Müller细胞的损伤作用最明显;同时提前2 h加入Akt信号通路阻断剂LY294002后,Akt信号传导通路的保护作用被阻断减弱。结论 EPO对体外正常培养的Müller细胞不具有促进增殖迁移作用;正常培养条件下Müller细胞自身不表达并且不分泌EPO,氧化损伤条件下Müller细胞自身可低分泌EPO;加入外源性EPO后,EPO可能通过Akt信号传导通路对H2O2损伤的Müller细胞发挥保护作用。
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