【摘 要】
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采用RT-PCR技术克隆南极衣藻GR基因ORF全长cDNA,然后经酶切、连接等步骤构建其原核表达载体;并对其表达的诱导时间、IPTG浓度、温度进行了优化,以期获得较大量的酶蛋白。结果
【机 构】
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广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室,国家海洋局第一海洋研究所海洋生物活性物质重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目,40876102号,40876107号.
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采用RT-PCR技术克隆南极衣藻GR基因ORF全长cDNA,然后经酶切、连接等步骤构建其原核表达载体;并对其表达的诱导时间、IPTG浓度、温度进行了优化,以期获得较大量的酶蛋白。结果表明,将构建的原核表达载体pET-GR导入大肠杆菌BL21,可以高效表达融合蛋白;且表达的蛋白均以包涵体的形式存在;经SDS-PAGE电泳结果显示,获得的目的蛋白分子量为52.2kDa,符合预期分子量;GR蛋白在大肠杆菌中诱导表达优化条件为,1.0mmol/L的IPTG,28℃诱导3h。这些结果为进一步深入研究该基因的特性与功
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