PCR制备地高辛配基标记的探针检测登革病毒核酸

• 作 者: 庄坚 郭辉玉 陈火胜
• 机 构: 中山医科大学微生物学和免疫学教研室,中山医科大学微生物学和免疫学教研室,导师
• 出 处: 中山大学学报：医学科学版
• 发表日期: 1993年1期
• 关键词: 地高辛 DEN 标记 配基 登革病毒 CDNA探针 特异性 核酸 RNA斑点杂交 质粒DNA digoxigenin polymerase chain reac
• 基金项目: CMB基金及卫生部医学重点科技项目基金资助

用聚合酶链反应(PCR)技术，以重组质粒PDEⅡ305 DNA为模板．在底物中补充标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(DIG-dUTP)，经扩增反应制备了地高辛配基标记的登革病毒2型(DEN2)cDNA探针。DNA-RNA斑点杂交表明该探针有DEN2型特异性，可检出0．1pgDEN2-RNA。PCR扩增标记只用10ng模板DNA，数小时内可制备约1ug标记的cDNA探针，而用六聚棱苷酸随机引物(RHP)标记，从质粒DNA酶切、片段回收到标记获得探针，至少需数10h。可见PCR技术直接制各地高辛配基标记的cDNA探