论文部分内容阅读
目的：利用毕赤酵母表达具有生物学活性的蛇毒类凝血酶安克洛。方法：根据已知的天然安克洛的氨基酸序列，结合酵母偏好密码子，设计并合成了安克洛基因序列，将其克隆至表达载体pPIC9中，得到表达质粒pPIC9／Ancrod，电转至毕赤酵母GS115（His-）菌株感受态中，通过表达筛选获得工程菌株。采用5L发酵罐对工程菌进行发酵，表达安克洛。在诱导表达阶段，补加甲醇-山梨醇混合碳源。经疏水柱、肝素亲和柱和阳离子柱三步分离纯化得到重组安克洛，并鉴定其体外生物学活性。结果：重组安克洛表观相对分子质量为43000～48