细胞外基质对人毛乳头细胞特性的影响

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mahui0503
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目的 观察不同细胞外基质(ECM)对体外培养的人毛乳头(DP)细胞特性的影响.方法 将新鲜分离的人DP接种至已预先分别被Ⅳ型胶原蛋白、纤粘连蛋白、基质胶(Matrigel)或透明质酸钠凝胶包被的培养板,显微镜下观察DP细胞的迁出和生长;采用同样方法进行第4代DP细胞的培养,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖活性,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测不同ECM对DP细胞相对特殊标志物表达的影响.结果 Ⅳ型胶原蛋白和纤粘连蛋白组中的DP在接种36 h即有细胞迁出,Matrigel组则至少需4d,透明质酸钠凝胶组中一直未见细胞迁出.Ⅳ型胶原蛋白和纤粘连蛋白组与对照组类似,细胞均可呈现出聚集性生长趋势;DP细胞在Matrigel包被的培养孔中央呈贴壁生长,在周围则聚集形成球样结构;细胞无法在透明质酸钠凝胶表面贴壁生长.细胞培养5d后,Ⅳ型胶原和纤粘连蛋白组中DP细胞吸光度(A)值(1.36±0.28和1.31 ±0.18)明显高于对照组(1.21±0.12),差异有统计学意义(P<0.05);Matrigel和透明质酸钠凝胶两组中DP细胞A值(1.08±0.21和0.26±0.05)明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).Real-time PCR结果显示:与对照组比较,Matrigel组中仅神经细胞黏附分子(NCAM)和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)基因的表达显著增加,而多能蛋白聚糖(Versican)的表达无变化.透明质酸钠凝胶组中Versican、NCAM和α-SMA基因的表达均显著降低,而Ⅳ型胶原和纤粘连蛋白组中Versican、NCAM和α-SMA蛋白的表达无明显变化.Western blot结果显示:与对照组比较,各组DP细胞内Versican、NCAM和α-SMA蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 在平面培养条件下,外源性的ECM(Matrigel、Ⅳ型胶原、透明质酸钠凝胶和纤粘连蛋白)虽然可改变DP细胞的生长特性,但并不能影响与DP细胞生物学功能相关的特性.
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