【摘 要】
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目的 选取登革病毒Ⅰ～Ⅳ外膜蛋白DⅢ区基因进行克隆、表达和纯化,以获得能应用于血清学诊断的纯化重组蛋白.方法 用RT-PCR法扩增登革病毒Ⅰ～Ⅳ毒株外膜蛋白DⅢ区基因,与表达载
【机 构】
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泉州市第一医院科室,福州福建省疾病预防控制中心
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目的 选取登革病毒Ⅰ～Ⅳ外膜蛋白DⅢ区基因进行克隆、表达和纯化,以获得能应用于血清学诊断的纯化重组蛋白.方法 用RT-PCR法扩增登革病毒Ⅰ～Ⅳ毒株外膜蛋白DⅢ区基因,与表达载体pET-30a连接,构建重组表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,重组蛋白用电洗脱法进行纯化.纯化的重组蛋白用间接ELISA法、捕获ELISA法和夹心ELISA应用于血清学检测,检测结果与间接免疫荧光法进行比较.结果 重组表达质粒在大肠杆菌中表达高产量的重组蛋白,纯化的重组蛋白对登革热病毒感染者具有很高的检出率,与间接免疫荧光法检测结果基本相符.结论 登革病毒Ⅰ～Ⅳ外膜蛋白DⅢ区基因在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白可应用于血清学检测.
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