【摘 要】
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目的建立高通量评价药物遗传毒性的微型细菌回复突变(Ames)试验。方法采用平皿掺入法进行标准Ames试验,采用6孔板掺入法进行微型Ames试验,两试验均设置阴性对照组和阳性对照
【机 构】
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天津药物研究院新药评价有限公司; 天津市新药非临床评价技术工程中心;
【基金项目】
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国家科技重大新药创制项目(2015ZX09501004);天津市科技计划项目(16PTGCCX00090)
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目的建立高通量评价药物遗传毒性的微型细菌回复突变(Ames)试验。方法采用平皿掺入法进行标准Ames试验,采用6孔板掺入法进行微型Ames试验,两试验均设置阴性对照组和阳性对照组,2组又分别分为代谢活化和非活化2个亚组,各组培养基中分别加入菌液(鼠伤寒沙门菌组氨酸缺陷型菌株:TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535),活化组加大鼠肝微粒体酶(S9)混合液,阳性对照组再加入阳性诱变剂:Dexon(-S9),应用于TA97、TA98和TA102;Na N3(-S9),应用于TA100和TA1535;2-AA(+S9),应用于TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535。凝固后37℃温箱培养约48 h,计数各组回变菌落数。结果在标准Ames试验中,阴性对照组各个菌株回变菌落数均在本实验室自发回变菌落数正常值范围内。在两试验中,阳性对照组所诱导的回变菌落数均是阴性对照组的2倍以上,标准试验细菌回变菌落数约为微型试验的5倍。结论在6孔板上进行微型细菌回复突变试验,大大减少了受试物的用量,提高了筛选速度。本实验室建立的微型细菌回复突变试验背景数据,用于遗传毒理的检测是高效可靠的。
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