类猪圆环病毒P1-ORF1真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-ORF1的构建

• 作 者: 张丹 温立斌 何孔旺 范红结
• 机 构: 南京农业大学动物医学院,江苏省农业科学院兽医研究所
• 出 处: 云南农业大学学报：自然科学版
• 发表日期: 2016年3期
• 关键词: 类猪圆环病毒ORF1 pcDNA31(+)载体 RT-PCR 免疫组化 P1-ORF1 pcDNA3.1 （＋） vector RT-PCR immuno
• 基金项目: 国家自然科学基金项目（31272574,30972184）,江苏省自主创新项目[CX（14）2045].

为研究类猪圆环病毒P1-ORF1能否在真核细胞中表达,本文通过PCR技术扩增P1-ORF1基因,利用pcDNA3.1（＋）载体构建重组质粒pcDNA3.1（＋）-ORF1,通过lipofectamine2000脂质体介导转染PK-15细胞以表达P1-ORF1基因,再通过RT-PCR及免疫组织化学技术从转录和蛋白质水平上鉴定该基因的表达。结果显示：从转染的细胞中提取总RNA,经Recombinant DNaseI处理除去基因组DNA后,RT-PCR能够扩增出359bp的目的片段;免疫组化分析显示：pcDNA