均匀设计优化兴安落叶松ISSR—PCR反应体系

• 作 者: 王洪梅 周志军 李艳霞 王福德 翁海龙 康迎昆 周显昌 李春
• 机 构: 黑龙江省林业科学研究所,哈尔滨剑桥三中
• 出 处: 林业科技
• 发表日期: 2013年1期
• 关键词: 兴安落叶松 ISSR 均匀设计 优化体系 Larix gmelinii ISSR Uniform design Optimization
• 基金项目: 国家林业公益性行业科研专项子项目“兴安落叶松种质资源评价与新品种选育及繁殖技术”（201004009-5）,黑龙江省森工总局应用研究项目（Y2010012）

采用均匀设计方法，对影响兴安落叶松ISSR—PCR体系的MgCl2、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶和模板5个组分的浓度进行了u16（4^5）和u12（3^5）两轮优化，建立了适合于兴安落叶松的ISSR—PCR反应体系。该优化的20p．L反应体系包含MgCb3．0mmol／L、dNTPs0．15mmol／L、引物0．5ttmol／L、TaqDNA聚合酶1．0U、模板20ng／20μL。并进一步进行梯度退火试验，找到了最适的兴安落叶松ISSR退火温度为56．5℃。利用所确立的体系对部分兴安落叶松种质进行