【摘 要】
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采用RT-PCR方法,以IBV M41毒株的S1基因为模板扩增出了大小为468bp的目的片段(命名为poly156S1),该片断保守性、抗原性较好.将获得的目的基因定向克隆到表达载体pET-32a-c(+)
【机 构】
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惠州出入境检验检疫局,广东惠州516006
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采用RT-PCR方法,以IBV M41毒株的S1基因为模板扩增出了大小为468bp的目的片段(命名为poly156S1),该片断保守性、抗原性较好.将获得的目的基因定向克隆到表达载体pET-32a-c(+)中,获得了重组质粒pET-32a-c(+)-poly156S1.将该重组质粒转入表达菌Origami (DE3)中,用IPTG进行诱导表达,获得了大小约为34 KD的重组蛋白poly156S1.Western-blot证实该重组蛋白能与IBV阳性鸡血清发生特异性反应.用纯化好的重组蛋白poly156S1免疫BALB/c 小鼠,按常规方法进行单克隆抗体的制备,成功获得了针对M41 S1蛋白的3株单克隆杂交瘤细胞8D2、8D6、10F9,其IgG亚类分别为IgG1、IgG2a、IgG2b,轻链均为κ型.按常规方法对各株单克隆杂交瘤细胞进行了小鼠腹水单抗的制备与纯化,并用以重组蛋白poly156S1为包被抗原的间接ELISA对纯化后的腹水单抗进行了效价测定,及其与重组蛋白poly156S1亲和力的分析.结果表明:腹水单抗8D2、8D6、10F9的ELISA效价分别达到1.78×218,1.37×221,1.31×216;单抗8D6与重组蛋白poly156S1的亲和力最高.Western-blot进一步证实单抗8D6与重组蛋白poly156S1具有良好的反应性.
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