【摘 要】
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为探讨生理强度的稳定层流剪应力对内皮细胞骨架actin相关蛋白VASP特征影响规律,我们采用胰蛋白酶消化法分离人脐静脉内皮细胞(HUVECs),模拟体内流动环境,建立平行板流动腔模
【机 构】
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武汉大学,LEMTA -UMR 7563 CNRS/INPL/UHP 54500 Vandoeuvre-lès-Nancy,四川大学
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为探讨生理强度的稳定层流剪应力对内皮细胞骨架actin相关蛋白VASP特征影响规律,我们采用胰蛋白酶消化法分离人脐静脉内皮细胞(HUVECs),模拟体内流动环境,建立平行板流动腔模型.利用细胞图像分析系统和ALEXA488-若丹明-次毒蕈环肽双标记法,观察内皮细胞在稳态层流下形态、actin排列变化与VASP分布变化之间的规律.采用Western blot 定量动态检测细胞内VASP表达及磷酸化的水平.结果表明,内皮细胞在10 dyn/cm2剪切作用后,随时间细胞逐渐延长,长轴趋于剪应力作用方向排列,细胞与静息态的细胞相比,细胞内骨架沿剪应力方向重组, 与此同时VASP表达增强,沿着actin纤维呈点状分布,尤其集中在细胞膜下actin末端区域;Western blot 检测显示在剪切后,细胞内VASP出现快速磷酸化,VASP总体表达量增加,2h达高峰后逐渐恢复,8h后再次逐渐升高.以上结果提示血流动力学特性中剪应力引起了细胞胞质内骨架蛋白分子重组,血管内皮细胞形态改变,在此过程中,VASP发挥骨架调节蛋白的作用.
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