【摘 要】
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抽提人肝组织总RNA,通过RT-PCR方法扩增出纤溶酶原Kringle 5片段,将其和分泌表达载体pPIC9K相连,转化毕赤酵母GS115,筛选获得在酵母细胞中遗传稳定表达Kringle 5重组蛋白的工
【机 构】
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上海大学生命科学学院,上海市第一肺科医院肺癌免疫研究室
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抽提人肝组织总RNA,通过RT-PCR方法扩增出纤溶酶原Kringle 5片段,将其和分泌表达载体pPIC9K相连,转化毕赤酵母GS115,筛选获得在酵母细胞中遗传稳定表达Kringle 5重组蛋白的工程菌.经甲醇诱导表达5d后,发酵液总蛋白分泌量约120 mg/L,SDS-PAGE呈现相对分子质量约为15×103特异表达带.经Ni-NTA-Agarose纯化后,重组蛋白对人脐静脉内皮细胞有明显的抑制作用,ID50约为4.0μg/ml.
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