【摘 要】
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以磨盘柿(Diospyros kakiThunb.)果皮为试材,提取乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase)并进行纯化。经过30%~70%硫酸铵沉淀分离、Sephadex G-25脱盐柱脱盐、DEAE Sepharose Fas
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以磨盘柿(Diospyros kakiThunb.)果皮为试材,提取乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase)并进行纯化。经过30%~70%硫酸铵沉淀分离、Sephadex G-25脱盐柱脱盐、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析纯化后,研究温度、pH、金属离子、底物对乙醇脱氢酶活性的影响。结果表明,纯化后乙醇脱氢酶纯化倍数为41.80倍,活性回收率为44.73%。将乙醇脱氢酶酶液分别置于20、30、40、45、50、55和60℃温育后测定,其最适反应温度为45℃;在pH 5.0、7.0、8.0、9.0、10.0和11.0下乙醇脱氢酶的最适pH为10.0;在甲醇、乙醇、丙醇、丁醇和戊醇为反应底物时,最适底物为丁醇;金属离子中,K+和Na+对活性略有增强的作用,二价金属离子除Mg2+几乎没有影响之外,Zn2+、Mn2+和Ca2+对酶活性有一定的抑制作用,Cu2+和Fe3+则完全抑制了酶的活性。在25℃,pH 10.0的条件下ADH氧化乙醇的米氏动力学参数Km值为8.33 mmol/L,最大反应速度Vmax为0.021μmol/min。乙醇脱氢酶的活性受温度、pH、金属离子、底物的影响较大,并且只有在合适的条件下,酶活性才能达到最大值。
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