山羊精子介导法转染外源基因影响因素及最适条件的研究

• 作 者: 孙新明 邱效武 江嘉陵 魏泓
• 机 构: 井冈山大学医学院,第三军医大学基础部实验动物学教研室
• 出 处: 生物技术通报
• 发表日期: 2009年S1期
• 关键词: 精子介导基因转染 最适转染条件 山羊 Sperm-mediated gene transferOptimized conditions of transfect

探讨山羊精子与外源DNA共孵育转染外源DNA效率的影响因素,优化精子转染程序。用DIG免疫组化方法检测和比较精子转染效率,因素为精子洗涤程度、转染缓冲液、精子活力、BSA、肝素、异种动物精浆等。离心洗涤3次以内的山羊精子DNaseⅠ消化前、后阳性率随洗涤次数增加而显著增加(P【0.05),而离心3次以上的转染效率略有下降;以mDM为共孵育缓冲体系可获得较高的转染效率;活力为0.55的精子转基因阳性率显著低于活力为0.9的精子(消化前、后阳性率分别为35.4±2.9%和21.8±5.3%