人p53不同突变体的构建、表达及其对亚砷酸盐诱导细胞凋亡的影响

• 作 者: 刘爱华 龚小卫 魏洁 明小燕 王达安 邓鹏 罗深秋 姜勇
• 机 构: 南方医科大学南方医院呼吸科,南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室,南方医科大学细胞生物学教研室
• 出 处: 南方医科大学学报
• 发表日期: 2008年5期
• 关键词: P53 定点突变 载体构建 基因表达 细胞凋亡 亚砷酸盐 p53 site-directed mutagenesis vector construction g
• 基金项目: 国家自然科学基金（30572151）,国家自然科学基金委员会-广东省人民政府自然科学联合基金（U0632004）,广东省自然科学基金（05004730）.

目的构建人p53的不同突变体，并在真核细胞中表达，研究这些突变体对应激刺激诱导细胞凋亡的影响。方法采用PCR方法扩增人p53cDNA序列，使用常规酶切、连接方法将其重组至pcDNA3／HA载体中，对阳性克隆进行酶切和PCR鉴定。将阳性重组体的第15位和第46位丝氨酸突变为丙氨酸，并转染NIH3T3细胞，观察其在NIH3T3细胞内的表达情况。转染不同突变体的NIH3T3细胞用AnnexinV．FITC和碘化丙啶双标后，利用流式细胞术检测亚砷酸盐刺激前后的凋亡情况。结果构建的pcDNA3／H—p53（WT）、