论文部分内容阅读
目的 研究RNA干扰(RNAi)效应对慢性粒细胞白血病(CML)bcr/abl融合基因表达的抑制作用.方法体外化学合成针对bcr/abl融合基因的小干扰RNA(siRNA),并用电穿孔方法将siRNA转染K562细胞株,以未转染的细胞及非特异性的siRNA转染细胞作对照;同时转染带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的载体作为阳性对照,流式细胞术检测其绿色荧光以确定转染效率;实时定量RT-PCR及Western blot法检测siRNA的抑制效应.MTF法检测细胞增殖抑制率.膜联蛋白Ⅴ(An-nexin Ⅴ)及碘化丙锭双染法测细胞凋亡率.结果电穿孔的转染效率可达70%;化学合成的siRNA可以抑制bcr/abl融合基因在mRNA和蛋白水平的表达;特异性siRNA可以抑制细胞增殖,转染24 h细胞增殖抑制率达47%,48 h达56%;特异性siRNA转染细胞24 h组凋亡率为15.05%,48 h组为19.47%,与对照组(1.00%)比较明显提高.结论在细胞水平上,化学合成的siRNA可以抑制bcr/abl融合基因的表达,为利用RNA干扰作为基因治疗的研究奠定基础。