【摘 要】
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目的 检测肺癌细胞中WW结构域E3泛素蛋白连接酶1(WWP1)和人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)表达,并探讨敲低WWP1表达对肺癌SPC-A1细胞增殖和侵袭能力影响机制.方法 利用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测肺癌细胞SPC-A1、H1299及正常肺上皮细胞BEAS-2B中WWP1和PTEN表达;WWP1 siRNA转染SPC-A1肺癌细胞以敲低WWP1表达,分为si-NC组,siWWP1#1组及siWWP1#2组,利用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞WWP1和PTEN表达,通过Tran
【机 构】
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首都医科大学电力教学医院胸外科,北京100073;解放军总医院第三医学中心胸外科,北京100039
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目的 检测肺癌细胞中WW结构域E3泛素蛋白连接酶1(WWP1)和人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)表达,并探讨敲低WWP1表达对肺癌SPC-A1细胞增殖和侵袭能力影响机制.方法 利用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测肺癌细胞SPC-A1、H1299及正常肺上皮细胞BEAS-2B中WWP1和PTEN表达;WWP1 siRNA转染SPC-A1肺癌细胞以敲低WWP1表达,分为si-NC组,siWWP1#1组及siWWP1#2组,利用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞WWP1和PTEN表达,通过Transwell法检测肺癌细胞迁移和侵袭,细胞计数试剂(CCK-8)法检测细胞增殖.结果 在正常肺上皮细胞BEAS-2B,肺癌细胞SPC-A1和H1299中WWP1 mRNA相对表达量分别为1.00士0.08、3.10±0.24和2.30±0.20,差异有统计学意义,F=93.960,P＜0.001;PTEN表达量分别为1.00土0.10、0.34土0.04和0.53±0.04,差异有统计学意义,F=91.940,P＜0.001;与正常细胞株相比,WWP1在肺癌细胞株中表达增加,而PTEN表达则降低.WWP1和PTEN蛋白检测结果与qRT-PCR检测结果一致.敲低WWP1后,si-NC组、siWWP1#1组和siW-WP1#2组WWP1 mRNA相对表达量分别为1.00±0.09、0.32±0.03和0.27±0.03,差异有统计学意义,F=151.200,P＜0.001;PTEN表达量分别为1.00±0.07、2.81±0.21和3.34±0.33,差异有统计学意义,F=85.810,P＜0.001,与si-NC组相比,WWP1在siWWP1#1组,siWWP1#2组表达降低,而PTEN表达则增加.WWP1和PTEN蛋白检测结果与qRT-PCR检测结果一致.Transwell迁移结果显示,si-NC组、siWWP1#1组和siWWP1#2组细胞迁移数目分别为(126土9)、(44±4)和(50±4)个,差异有统计学意义,F=166.400,P＜0.001;Transwell侵袭结果显示,si-NC组、siW-WP1#1组和siWWP1#2组细胞侵袭数目分别为(104±10)、(40±3)和(46土5)个,差异有统计学意义,F=83.910,P＜0.001;与si-NC组相比,siWWP1#1组,siWWP1#2组细胞迁移和侵袭数目均降低.CCK-8法检测敲低WWP1对肺癌细胞增殖活力影响结果显示,si-NC组,siWWP1#1组,siWWP1#2组细胞增殖活力分别为(100士8)％、(52士4)％和(42士3)％,差异有统计学意义,F=173.200,P＜0.001.与si-NC组相比,siWWP1#1组和siWWP1#2组细胞增殖活力降低.结论 WWP1在肺癌中高表达,敲低WWP1表达可促进PTEN表达,降低肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力.WWP1可能作为肺癌的一个重要预后标志物,成为治疗肺癌的潜在分子靶点.
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