大鼠脑源性神经营养因子基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

• 作 者: 欧阳长杰 滕大才 曲德伟 王德广 徐铁军
• 机 构: 徐州医学院人体解剖学教研室
• 出 处: 解剖学杂志
• 发表日期: 2012年1期
• 关键词: 脑源性神经营养因子基因 重组质粒 基因表达 COS-7细胞 brain-derived neurotrophic factor generecombinant
• 基金项目: 江苏省自然科学基金项目（BK2009087）,徐州医学院科研课题（2010脚17）,徐州市科技计划项目（XM098084）

构建脑源性神经营养因子（BDNF）基因真核表达载体，检测其转染COS-7细胞后的表达。方法：从大鼠海马组织中提取总RNA，采用RT-PCR方法获得目的基因片段，克隆至pGEM-T载体中。经测序确证后将BDNFcDNA片段与pEGFP-N1载体定向连接。将鉴定正确的重组体pEGFP-N1-BDNF以脂质体法转染至COS-7细胞中，用RT-PCR鉴定BDNFmRNA的表达，免疫印迹法检测BDNF蛋白质表达水平。结果：克隆了BDNF的cDNA，并构建了其真核表达载体pEGFP-N1-BDNF，经限制性内切酶酶切