【摘 要】
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目的:制备Myosin Va多克隆抗体,为深入研究其功能和探讨其与肿瘤等疾病的相关性提供工具。方法:PCR扩增编码人Myosin Va C末端(MyoVaCT)278个氨基酸的cD-NA片段,DNA重组入原
【机 构】
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北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所临床实验室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室,
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目的:制备Myosin Va多克隆抗体,为深入研究其功能和探讨其与肿瘤等疾病的相关性提供工具。方法:PCR扩增编码人Myosin Va C末端(MyoVaCT)278个氨基酸的cD-NA片段,DNA重组入原核表达质粒pET28a,转化大肠杆菌BL21菌株,异丙基β-D硫代半糖苷(IPTG)诱导表达His-MyoVaCT融合蛋白。经电泳纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。通过ELISA和免疫荧光法鉴定血清特异抗体效价和特异性。结果:成功构建了pET28a/MyoVaCT原核表达载体,转化BL21后可高效表达融合蛋白His-MyoVaCT,纯化蛋白免疫小鼠后产生的Myosin Va多抗可特异检测细胞内源性Myosin Va的表达及定位情况,同时能特异识别细胞内外源表达的Myosin Va分子。结论:获得了效价和特异性都良好的Myosin Va抗体,适合应用于Myosin Va的检测。
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