四环素诱导型单载体的构建、体外表达与鉴定

• 作 者: 乔宪凤 马卓 毕延震 华再东 华文君 肖红卫 周荆荣 郑新民
• 机 构: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/湖北省动物胚胎工程及分子育种重点实验室,东北农业大学动物科技学院
• 出 处: 农业生物技术学报
• 发表日期: 2012年8期
• 关键词: pTet-on-Advanced 诱导表达载体 真核表达 猪成纤维细胞 pTet-on-Advanced Inducible expression vecto
• 基金项目: 基金项目：国家转基因生物新品种培育重大专项（No.2011ZX08006-002,No.2011ZX08011-030B,No.2011ZX08006-003,No.2011ZX08010-3）和湖北省重点实验室（No.2012ZDl20）

pTet．on—Advanced双载体表达系统应用于转基因动物研制，需要建立两种动物品系，经过杂交和筛选，才有可能得到转基因个体，操作繁琐，转化效率低。本研究在改良的四环素（Tet．on）基因可调控系统基础上，通过PCR的方法，分别从pTet—Oil—Advanced质粒和pEGFP—N1质粒中扩增rtTA和EGFP基因，测序正确后，将n掰和EGFP基因亚克隆入pTRE—Tight载体中，构建四环素pTRE—Tight—rtTA—EGFP单载体表达系统，然后采用脂质体法，将新构建的单载体表达体系pTRE．