【摘 要】
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采用基因重组技术将黑曲酶糖化酶GAI cDNA与MF-α1因子的启动子-信号序列及PGK基因的转录终止位点重组进大肠杆菌-酵母穿梭质粒构建酵母表达载体YepMGT20,用原生质体转化法引
【机 构】
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中山大学生命科学学院,广州,510275;广州市微生物研究所,广州,510250
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采用基因重组技术将黑曲酶糖化酶GAI cDNA与MF-α1因子的启动子-信号序列及PGK基因的转录终止位点重组进大肠杆菌-酵母穿梭质粒构建酵母表达载体YepMGT20,用原生质体转化法引入酿酒酵母GRF18,在酵母MF-α1启动子-信号序列及PGK终止位点的调控下,实现糖化酶的高表达,99%的酶活力分泌至胞外,构建的酿酒酵母GRF18(YEpMGT20)在10%淀粉的培养基中培养48 h,淀粉水解率达96.1%;在10%淀粉的YPS培养基中发酵96 h可产生5.6%(v/v)的酒精(在20%淀粉培养基中酒精产量达8.4%),在无选择压力的SC培养基中培养5 d,重组质粒的丢失率只有1.9%.
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