【摘 要】
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提取北京油鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌等不同组织的总RNA,利用RT-PCR方法检测α1-酸性糖蛋白基因(α1-AGP)mRNA的差异表达。将α1-AGP基因完整开放阅读框定向插入
【机 构】
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中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,蚌埠医学院生物科学系,蚌埠医学院检验系,内蒙古农业大学动物科学与医学学院
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划项目(863计划)项目(编号:2006AA10Z198,2007AA10Z170)资助
论文部分内容阅读
提取北京油鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌等不同组织的总RNA,利用RT-PCR方法检测α1-酸性糖蛋白基因(α1-AGP)mRNA的差异表达。将α1-AGP基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-C1,构建带有GFP报告基因的重组表达载体pEGFP-α1-AGP,将其导入北京油鸡体外培养细胞中,并进行G418药物筛选和克隆化培养。结果表明:α1-AGP基因开放阅读框长度为612bp,编码203个氨基酸,在北京油鸡肝、肺、腿肌和胸肌中有表达;转染后24、48和72h,pEGFP-α1-AGP转染率在31.3%～47.6%之间,绿色荧光主要集中在细胞核中,随着表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状,经药物筛选和克隆化培养,获得表达pEGFP-α1-AGP融合蛋白的阳性克隆细胞株,利用RT-PCR与Westernblotting检测确认pEGFP-α1-AGP已整合到北京油鸡成纤维细胞的基因组中,在优化的条件下,阳性细胞凋亡率、形态、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著(P>0.05)。
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