【摘 要】
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目的 探讨温肺化纤汤治疗特发性肺纤维化(IPF)其可能机制.方法 梯度密度离心法分离提取C57BL/6小鼠肺间充质干细胞(LMSCs).体外培养LMSCs,采用不同浓度(100、200、300、400、500、600、700、800μmol/L)的过氧化氢(H202)诱导细胞损伤,MTT法检测LMSCs细胞存活率,选择细胞存活率约为50％的H2O2损伤浓度进行后续试验.细胞分为正常对照组、温肺化纤汤组,温肺化纤汤组设浓度为1600、800、400、200、100、50、25 μg/ml,MTT法检测温肺化
【机 构】
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江西中医药大学附属医院,江西省南昌市八一大道445号,330006;江西中医药大学中医学院;广州中医药大学第二临床医学院
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目的 探讨温肺化纤汤治疗特发性肺纤维化(IPF)其可能机制.方法 梯度密度离心法分离提取C57BL/6小鼠肺间充质干细胞(LMSCs).体外培养LMSCs,采用不同浓度(100、200、300、400、500、600、700、800μmol/L)的过氧化氢(H202)诱导细胞损伤,MTT法检测LMSCs细胞存活率,选择细胞存活率约为50％的H2O2损伤浓度进行后续试验.细胞分为正常对照组、温肺化纤汤组,温肺化纤汤组设浓度为1600、800、400、200、100、50、25 μg/ml,MTT法检测温肺化纤汤的毒性.细胞分为正常对照组、模型组、温肺化纤汤组,温肺化纤汤设浓度为1600、800、400、200、100、50、25 μg/ml,根据剂量最小化和疗效最大化的原则,结合细胞存活率确定药物的最佳浓度用于后续试验.实验分为正常对照组、模型组、阳性对照组及温肺化纤汤低、中、高剂量组.除正常对照组外,模型组和温肺化纤汤各剂量组分别在温肺化纤汤预处理24h后均给予H2O2造模6h.造模结束后检测细胞上清中葡萄糖摄取量及乳酸水平,RT-PCR检测有氧糖酵解相关酶己糖激酶2 (HK2)、丙酮酸激酶2(PKM2) mRNA水平.结果 600 μmol/L H2O2作用于LMSCs 6h,细胞的存活率为(52.17±0.82)％,并作为后续氧化应激损伤模型的浓度.与正常对照组比较,不同浓度的温肺化纤汤(25～1600 μg/ml)对LMSCs均无毒性作用(P＞0.05).与模型组比较,不同浓度(25～1600 μg/ml)温肺化纤汤预处理的LMSCs存活率均显著增加(P＜0.01);按4倍设定等比浓度梯度,采取终浓度为25、100、400 μg/ml温肺化纤汤作为低、中、高剂量组的干预浓度.与正常对照组相比,模型组LMSCs氧化应激损伤后导致葡萄糖摄取量和乳酸含量降低(P＜0.01),有氧糖酵解相关酶HK2和PKM2 mRNA水平均下降(P＜0.05).与模型组对比较比,温肺化纤汤各剂量组均可增强葡萄糖摄取量和乳酸的水平(P＜0.05),且温肺化纤汤中、高剂量(100、400 μg/ml)则增强了HK2、PKM2 mRNA表达(P＜0.01).与阳性对照组比较,温肺化纤汤高剂量组葡萄糖摄取量、乳酸含量均升高(P＜0.05).与温肺化纤汤低剂量组比较,温肺化纤汤中、高剂量组的HK2、PKM2 mRNA水平均明显增高(P＜0.05).结论 温肺化纤汤可能通过增强LMSCs的有氧糖酵解改善H2O2诱导的细胞氧化应激损伤,从而治疗IPF.
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