【摘 要】
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目的 建立铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa环介导等温扩增技术(LAMP)检测方法并初步应用于实验小鼠微生物控制.方法 根据铜绿假单胞菌oprL基因设计LAMP特异性引物,优化反
【机 构】
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重庆医科大学实验动物中心,重庆,400016重庆医科大学实验动物中心,重庆400016;浙江大学基础医学院,杭州310058;重庆医科大学附属第二医院肝胆外科,重庆,400010;
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目的 建立铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa环介导等温扩增技术(LAMP)检测方法并初步应用于实验小鼠微生物控制.方法 根据铜绿假单胞菌oprL基因设计LAMP特异性引物,优化反应条件,确立LAMP的检测体系;再通过对小鼠血清样本的检测,与《GB/T 14926.17-2001实验动物绿脓杆菌检测方法》对比,阳性结果再用PCR方法验证.结果 新建立的LAMP方法特异性强,灵敏度比普通PCR高103倍;当反应温度为66℃,内引物和环引物的浓度分别为70 μmol·L-1和30 μmol·L-1时,LAMP反应体系最佳;利用建立的LAMP方法检测87份小鼠血清样本,铜绿假单胞菌检出率为11.5% (10/87),比《GB/T 14926.17-2001实验动物绿脓杆菌检测方法》的高(0/87),阳性结果与PCR方法一致.结论 本研究建立的LAMP方法特异性强、灵敏度高、可重复率高、稳定性好,为检测铜绿假单胞菌提供了新的研究手段.
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