海藻糖合酶基因的克隆及其植物表达载体的构建

• 作 者: 张树珍 郑学勤
• 机 构: 中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室
• 出 处: 生命科学研究
• 发表日期: 2000年2期
• 关键词: 海藻糖合酶 植物表达载体 基因克隆 trehalose synthase genePCRplant expression vector
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目!(397690 0 1 4 )

以担子菌灰树花的菌丝体中提取总ＲＮＡ，并纯化出ｍＲＮＡ，ｍＲＮＡ经反转录合成ｃＤＮＡ第一链，以ｃＤＮＡ第一链为模板经ＰＣＲ扩增海藻糖合酶（Ｔｓａｓｅ）基因，获得一长约２．２ｋｂ的片段，把该片段连接一ｐＧＥＭ－Ｔ－ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ上进行测序，其全长共２１９９ｂｐ。随后将此片段以正向插入植物表达载体ｐＢＩ１２１的ＨｉｎｄⅢ＋Ｘｂａｌ位点构建ｐＵＢ，再把海藻糖合酶基因以正向插入载体ｐＵＢ的ＢａｍＨ