【摘 要】
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目的 揭示POU结构域第4类转录因子3(POU4F3)在肺腺癌组织的表达及其与肺腺癌患者预后的关系,并探索POU4F3对肺腺癌细胞迁移的作用.方法 免疫组织化学染色检测人肺腺癌及其癌旁组织(样本量均为118)中POU4F3的表达水平.利用Log-rank(Mantel-Cox)检验POU4F3表达水平与总生存期的关联性.以肺腺癌株为实验对象,构建稳定过表达(Lv-POU4F3)及其对照(Lv-control)或敲低POU4F3(shPOU4F3)及其对照(control shRNA)的慢病毒载体并分别转染
【机 构】
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山东大学附属山东省千佛山医院肿瘤科,山东济南250014;山东第一医科大学第一附属医院肿瘤科,山东济南250014;桂林医学院免疫学教研室,广西桂林541004;山东大学附属山东省千佛山医院肿瘤科,山
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目的 揭示POU结构域第4类转录因子3(POU4F3)在肺腺癌组织的表达及其与肺腺癌患者预后的关系,并探索POU4F3对肺腺癌细胞迁移的作用.方法 免疫组织化学染色检测人肺腺癌及其癌旁组织(样本量均为118)中POU4F3的表达水平.利用Log-rank(Mantel-Cox)检验POU4F3表达水平与总生存期的关联性.以肺腺癌株为实验对象,构建稳定过表达(Lv-POU4F3)及其对照(Lv-control)或敲低POU4F3(shPOU4F3)及其对照(control shRNA)的慢病毒载体并分别转染至SPCA1和A549细胞系,Western blotting验证POU4F3过表达或敲低转染效率.运用划痕实验、Transwell迁移实验和鬼笔环肽荧光实验检测细胞迁移能力.结果 免疫组化分析显示,118例肺腺癌组织中POU4F3的表达评分低于118例癌旁组织评分(1.5 vs 4.0),差异有统计学意义(P＜0.001).与POU4F3低表达肺腺癌患者相比,POU4F3高表达患者的总生存期延长(HR=2.04,95％CI:1.158～3.607,P=0.028).细胞实验结果显示,有效构建了过表达或敲低POU4F3的稳定转染肺腺癌细胞株.过表达POU4F3后,划痕实验表明,Lv-POU4F3组细胞划痕愈合率低于Lv-control组,差异有统计学意义(FSPCA1处理=69.86,PSPCA1=0.001;FA549处理=492.10,PA549＜0.001);Transwell 迁移实验表明,SPCA1-Lv-POU4F3组穿膜细胞数少于 SPCA1-Lv-control 组(599.0±11.36 vs 806.3±18.72,t=16.40,P＜0.001),A549-Lv-POU4F3组穿膜细胞数少于A549-Lv-control 组(181.0±18.68vs314.7±23.46,t=7.72,P=0.002);鬼笔环肽荧光实验表明,过表达 POU4F3后,SPCA1细胞微丝变细、伪足较少,Lv-POU4F3组的平均荧光强度低于Lv-control组(23.30±1.34 vs 33.45±1.85),差异有统计学意义(t=7.67,P=0.002).敲低POU4F3后,划痕实验表明,shPOU4F3组细胞划痕愈合率高于control shRNA 组,差异有统计学意义(FSPCA1处理=114.60,PSPCA1＜0.001;FA549处理=1 710.00,PA549＜0.001).Transwell 迁移实验表明,SPCA1-shPOU4F3组穿膜细胞数多于 SPCA1-control shRNA 组(970.00±14.53 vs 585.00±25.53,t=22.70,P＜0.001),A549-shPOU4F3组穿膜细胞数多于 A549-control shRNA 组(528.00±29.14 vs 185.30±9.50,t=19.37,P＜0.001);鬼笔环肽荧光实验表明,敲低POU4F3后,SPCA1细胞微丝变粗、伪足增多,shPOU4F3组的平均荧光强度高于 control shRNA 组(48.53±3.30 vs 31.07±2.32),差异有统计学意义(t=7.50,P=0.002).结论 POU4F3在人肺腺癌患者癌组织中表达低于癌旁组织,POU4F3高表达者预后较佳,且POU4F3能够抑制肺腺癌细胞迁移.POU4F3可能是LUAD的抑癌基因并有望成为诊断和治疗LUAD的新靶标.
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