【摘 要】
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目的:构建肝癌细胞特异性小鼠IL-1a反义RNA表达载体,观察其对H22肝癌细胞小鼠移植瘤生长的影响及其相关机制.方法:构建由AFP最小启动子和CMV增强子嵌合序列调控的携IL-1a反义
【机 构】
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潍坊医学院,免疫学教研室,山东省高校免疫学重点实验室,山东,潍坊,261042
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目的:构建肝癌细胞特异性小鼠IL-1a反义RNA表达载体,观察其对H22肝癌细胞小鼠移植瘤生长的影响及其相关机制.方法:构建由AFP最小启动子和CMV增强子嵌合序列调控的携IL-1a反义RNA表达载体pafpIRES2-antiIL-1a1和pafpIRES2-antiIL-1a2,经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定进行鉴定.反义RNA表达载体转染小鼠H22肝癌细胞,分H22/mock组、H22/antiIL-1a1组、H22/antiIL-1a2三组,RT-PCR检测IL-1a的表达水平.以转染后的H22细胞皮下接种建立荷肝癌小鼠模型,观察移植瘤体积和重量,MTT法检测荷瘤小鼠脾脏中分离的NK细胞对H22细胞的杀伤活性.结果:经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定证实成功构建能够在肝癌细胞中特异性表达IL-1a反义RNA的表达载体pafpIRES2-antiIL-1a1和pafpIRES2-antiIL-1a2,转染H22细胞后细胞中IL-1a表达水平明显下降,以pafpIRES2-antiIL-1a2更为显著.成功建立荷肝癌小鼠模型,与H22/mock组小鼠相比, H22/antiIL-1a2组小鼠移植瘤体积较小,生长显著减慢(P
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