【摘 要】
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目的 研究海肾荧光素酶报告基因(Rluc)在大肠杆菌中的表达情况及优化检测条件.方法 将Rluc克隆入大肠杆菌JM109,提取质粒后用EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ进行双酶切,并与制备好的pET-30a
【机 构】
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天津市疾病预防控制中心病原生物检测所,天津,300011;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所;南开大学医学院
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目的 研究海肾荧光素酶报告基因(Rluc)在大肠杆菌中的表达情况及优化检测条件.方法 将Rluc克隆入大肠杆菌JM109,提取质粒后用EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ进行双酶切,并与制备好的pET-30a(+)载体连接,再转化入大肠杆菌BL21.然后用ViviRen底物检测不同稀释液、不同浓度及时间等情况下重组克隆子中Rluc报告基因的荧光表达量,绘制表达曲线.结果 成功构建了Rluc在B121中的表达克隆子;ViviRen底物用PBS稀释比用LB稀释的检测灵敏度高约2倍;荧光检测的表达曲线在底物加入后迅速上升,至10min时达高峰,然后缓慢下降;阳性克隆子中Rluc的荧光表达线性检测范围广,阴性对照菌株中背景低;总结出了ViviRen底物用PBS稀释、荧光信号在10min后进行瞬时测定等优化检测条件.结论 Rluc报告基因可在大肠杆菌内高效表达,检测方法 具有特异性好、灵敏度高等特点.
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