【摘 要】
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目的优化染色质免疫共沉淀技术(ChIP)的关键条件，以期提高实验效率。方法拟以前列腺癌细胞株PC-3、DU145为实验材料，主要对裂解液体积、超声波的功率、脉冲及工作时间等方面进行调整，超声波破碎仪设置不同的条件(25%或30%功率，35 s或50 s间隔，3 s或5 s工作时间)，然后解交联富集这些DNA片段，测定其浓度及纯度值，分别行聚合酶链反应(PCR)并用2%琼脂糖凝胶电泳检测结果。结果前
【机 构】
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430030 武汉，华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科 湖北省泌尿外科研究所,430030 武汉，华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科 湖北省泌尿外科研究所,430030 武汉，华中科技
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目的优化染色质免疫共沉淀技术(ChIP)的关键条件，以期提高实验效率。
方法拟以前列腺癌细胞株PC-3、DU145为实验材料，主要对裂解液体积、超声波的功率、脉冲及工作时间等方面进行调整，超声波破碎仪设置不同的条件(25%或30%功率，35 s或50 s间隔，3 s或5 s工作时间)，然后解交联富集这些DNA片段，测定其浓度及纯度值，分别行聚合酶链反应(PCR)并用2%琼脂糖凝胶电泳检测结果。
结果前列腺癌细胞株合适的ChIP实验条件为：(1)超声波最大功率为30%，设定每38 s行3 s或55 s行5 s超声工作时间，总的时间45～75 s；(2)纯化后的DNA浓度>10 ng/μl、纯度值(A260/A280)>1.45，可以得到比较好的实验结果。
结论在前列腺癌细胞株PC-3、DU145中，选定合适的超声波频率后，总的超声工作时间为60 s时，便可得到合适的DNA片段；洗脱液体积固定后，分2次离心要比1次离心所得到的DNA纯度值高，所得到的实验结果也越明显。
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