【摘 要】
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目的 构建pup/mpa/dop/pafA基因过表达结核杆菌国际标准强毒株H37Rv和无毒株H37Ra. 方法 提取已构建的结核杆菌—大肠埃希菌重组穿梭质粒PMV361pup,PMV361mpa,PMV361dop和PMV
【机 构】
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石河子大学医学院病理生理学教研室,新疆地方与民族高发病教育部重点实验室,西部地区高发人兽共患传染性疾病防治协同创新中心,新疆石河子832002
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目的 构建pup/mpa/dop/pafA基因过表达结核杆菌国际标准强毒株H37Rv和无毒株H37Ra. 方法 提取已构建的结核杆菌—大肠埃希菌重组穿梭质粒PMV361pup,PMV361mpa,PMV361dop和PMV361pafA,利用电转化方法分别转入H37Rv和H37Ra感受态细胞,构建pup/mpa/dop/pafA基因过表达H37Rv和H37Ra,同时优化电转化脉冲电压,并应用QRT-PCR进行检测及鉴定. 结果 成功构建了pup/mpa/dop/pafA基因过表达H37Rv和H37Ra,重组菌均能表达目的基因,在2 100～2 300 V脉冲电压范围内构建的菌株目的基因相对表达量与电压呈正相关. 结论 构建的pup/mpa/dop/pafA基因过表达H37Rv和H37Ra均能表达相应目的基因,以电压为2 300 V电转化构建的菌株表达量较高.
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