【摘 要】
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目的 环状RNA(circRNA)可调节肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移,而影响肿瘤患者预后,而环状RNA(circRNA)在肺腺癌中作用的机制尚不清楚.文章探讨环状RNA hsa circ_0026782在肺腺癌患者中的差异表达及对肺腺癌细胞的增殖、迁移及凋亡的影响.方法 通过高通量测序检测肺腺癌组织及癌旁组织中有显著差异的环状RNA hsa_circ_0026782;通过实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测肺腺癌组织与癌旁组织、肺癌患者血清、术后血清与健康体检人、肺腺癌细胞系(PC9,A549,
【机 构】
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212013镇江,江苏大学医学院;212002镇江,江苏大学附属人民医院呼吸内科
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目的 环状RNA(circRNA)可调节肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移,而影响肿瘤患者预后,而环状RNA(circRNA)在肺腺癌中作用的机制尚不清楚.文章探讨环状RNA hsa circ_0026782在肺腺癌患者中的差异表达及对肺腺癌细胞的增殖、迁移及凋亡的影响.方法 通过高通量测序检测肺腺癌组织及癌旁组织中有显著差异的环状RNA hsa_circ_0026782;通过实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测肺腺癌组织与癌旁组织、肺癌患者血清、术后血清与健康体检人、肺腺癌细胞系(PC9,A549,H1975)及正常细胞系(BEAS-2B)之间hsa_circ_0026782的表达水平.选择下调最为显著的肺腺癌A549细胞进行过表达质粒转染(circ_0026782),选择下调相对较少的PC9细胞进行siRNA敲减(si-circ_0026782),使用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测过表达组(circ_0026782)与空质粒组(Empty-vector)、敲减组(si-circ_0026782)与对照组(si-NC)效率;通过对肺腺癌细胞进行平板细胞克隆形成实验、CCK-8(Cell-Counting Kit-8)实验检测hsa_circ_0026782对肺腺癌细胞的增殖作用的影响;通过划痕实验和Transwell迁移实验检测hsa_circ_0026782对肺腺癌细胞迁移的作用;通过qRT-PCR检测CMTM4 mRNA表达水平,通过蛋白免疫印迹实验(Western-Blot)检测增殖相关标志物、凋亡相关标志物及目的蛋白CMTM4表达水平.结果 相对于空载体组(1.19±0.52),转染过表达质粒组(534.2±39.12)能明显提高hsa_circ_002678的表达;相对于对照组(si-NC)(1.06±0.13),用小干扰RNA敲减hsa_circ_0026782(si-circ_0026782)(0.052±0.004)能明显减少hsa_circ_0026782的表达.平板克隆实验、CCK-8实验及Western blot实验结果均表明,hsa_circ_0026782的表达上调可明显抑制肺腺癌细胞增殖,敲减hsa_circ_0026782的表达下调可明显促进肺腺癌细胞的增殖.过表达hsa_circ_0026782(circ_0026782)可促进肺腺癌细胞凋亡,敲减hsa_circ_0026782(si-circ_0026782)可抑制肺腺癌细胞凋亡.细胞划痕实验表明,在A549细胞中,过表达hsa_circ_0026782(circ_0026782)组较空载体(Empty-vector)组可抑制细胞迁移;PC9细胞中,siRNA 敲减 hsa_circ_0026782组(si-circ_0026782)组较阴性对照组(si-NC)组促进细胞迁移.Transwell实验表明,在A549细胞中,过表达hsa_circ_0026782(circ_0026782)组较空载体(Empty-vector)组的细胞迁移数明显下降;siRNA 敲减 hsa_circ_0026782(si-ci rc_0026782)组较阴性对照组(si-NC)细胞迁移数明显增多.过表达hsa_circ_00 26782(circ_0026782)组(4.877±0.769)较空载体(Empty-vector)(0.948±0.229)组 CMTM4 mRNA 表达量增加;siRNA 敲减 hsa_circ_0026782(si-circ_0026782)组(0.167±0.07423)较阴性对照组(si-NC)组(1.166±0.311)CMT M4 mRNA 表达量下降.Western blot 实验结果表明,过表达 hsa_circ_0026782(circ_0026782)组较空载体(Empty-vector)组CMTM4蛋白表达量增加,敲减hsa_circ_0026782(si-circ_0026782)组较阴性对照组(si-NC)CMTM4蛋白表达量下降.结论 hsa_circ_0026782可通过CMTM4抑制肺腺癌的发生发展,有望成为肺腺癌诊断及干预治疗的靶点.
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