【摘 要】
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试验分别以猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)作为猪DNA、RNA病毒的代表,通过添加法制备带毒精液,采用样品前处理联合试剂盒硅基质柱纯化法(简称柱纯化法)
【机 构】
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广东出人境检验检疫局,中山大学生命科学学院,广东省农业科学院兽医研究所,国家人口计生委科学技术研究所
【基金项目】
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国家质量监督检验检疫总局科研项目（2013IK029）,广东省农业攻关项目（20128020305003）.
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试验分别以猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)作为猪DNA、RNA病毒的代表,通过添加法制备带毒精液,采用样品前处理联合试剂盒硅基质柱纯化法(简称柱纯化法)、优化TRIzol方法(简称TRIzol法)和国外文献方法(简称文献法)分别对带毒精液进行核酸提取,用实时荧光定量RT-PCR或PCR比较不同核酸提取方法的效率。结果显示,柱纯化法提取的病毒核酸的检测灵敏度达到最高,对PRRSV及PRV带毒自然精液、商品化稀释精液的检测低限分别可达1.26和0.13TCID50/mL。柱纯化法全程包括精液的前处理和核酸提取可在1h内完成,与文献法所用时间相当,比优化TRIzol法缩短0.5h。本试验优化了适用于从猪自然精液和商品化稀释精液中高效提取病毒核酸的方法。
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