人sTNFR1基因的克隆以及在NIH3T3细胞中的稳定表达

• 作 者: 彭仕芳 傅蕾 谭德明 刘洪波
• 机 构: 中南大学湘雅医院感染病科
• 出 处: 生命科学研究
• 发表日期: 2007年1期
• 关键词: 人可溶性肿瘤病坏死因子受体l 克隆 真核表达 稳定转染 human sTNFR1 clone eukaryotic expression stable t
• 基金项目: 湖南省自然科学基金资助项目（05JJ30178）.

以He1a细胞的总RNA为模板，用RT—PCR方法扩增sTNFR1全编码区基因片段，构建含有目的片段的T载体克隆及真核表达载体pcDNA3．1（-）重组质粒亚克隆，将重组质粒和脂质体共同转染NIH3T3细胞系，G418筛选稳定转染细胞株．经核苷酸序列测序和酶切鉴定，成功构建了pcDNA3．1（-）-sTNFR1真核表达质粒，脂质体法建立了高效表达sTNFRI的稳定转染细胞系，并经RT—PCR和Western Blotting鉴定．人sTNFR1基因能在NIH3T3细胞系中稳定表达，为今后的研究打下了基础．