沉默糖原合成激酶3β表达对胰腺癌PANC1细胞生长及上皮间质转化的影响

• 作 者: 宋博 马洪运 李森 邵卓 宋彬 郝俊 程鹏 金钢
• 机 构: 200433 上海，第二军医大学附属长海医院胰腺肝胆外科；解放军第454医院普外科,200433 上海，第二军医大学附属长海医院胰腺肝胆外科,200433 上海，第二军医大学附属长海医院胰腺肝胆外科,
• 出 处: 中华胰腺病杂志
• 发表日期: 2016年16期
• 关键词: Pancreatic neoplasms Glycogen synthase kinase 3β Cell proliferation Epithelial m

目的

观察沉默糖原合成激酶3β(GSK3β)的表达对胰腺癌PANC1细胞增殖及上皮间质转化(EMT)的影响，探讨其作用机制。

方法

设计并合成靶向GSK3β的3个siRNA(siRNA-GSK3β)及阴性对照siRNA(siRNA-NC)，分别转染PANC1细胞。通过RT-PCR法检测各组细胞GSK3β mRNA表达量，筛选基因沉默效果最佳的siRNA进行后续实验。采用MTT法检测转染细胞的增殖。采用RT-PCR法检测转染细胞Wnt/β-catenin通路成员Wnt、β-catenin、C-myc、CyclinD1mRNA；Hedgehog通路成员Shh、Smo mRNA；PI3K/Akt/mTOR通路成员PI3K、Akt、mTOR、4E-BP1、p70S6K mRNA以及EMT相关分子Slug、Snail、Twist、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin mRNA的表达。

结果

转染siRNA-NC的PANC1细胞GSK3β mRNA表达量为1.00±0.15，3个转染siRNA-GSK3β的GSK3β mRNA表达量分别为0.25±0.08、0.62±0.09、0.70±0.11，转染siRNA-GSK3β细胞均显著低于转染siRNA-NC细胞，差异有统计学意义(P值均<0.0001 )。转染后siRNA-GSK3β组细胞的增殖显著低于转染siRNA-NC组细胞，差异有统计学意义(P<0.05)。转染后siRNA-GSK3β组细胞的Wnt、β-catenin、C-myc、CyclinD1、PI3K、Akt、mTOR、4E-BP1、p70S6K、Slug、Snail、N-cadherin、Vimentin mRNA表达量分别为0.28±0.04、0.47±0.05、0.37±0.05、0.62±0.08、0.22±0.03、0.47±0.06、0.65±0.08、0.39±0.04、0.56±0.07、0.33±0.05、0.46±0.07、0.55±0.06、0.38±0.04，均显著低于转染siRNA-NC组细胞，差异有统计学意义(P值均<0.05)；Shh、Smo mRNA表达量分别为1.10±0.13、1.05±0.11，与转染siRNA-NC组细胞的差异无统计学意义；Twist mRNA表达量为0.62±0.08，低于转染siRNA-NC组细胞，E-cadherin mRNA表达量为2.12±0.25，高于转染siRNA-NC组细胞，但差异均无统计学意义。

结论

沉默PANC1细胞GSK3β基因表达后能够通过Wnt/β-catenin、PI3K/Akt通路抑制胰腺癌细胞的增殖，并抑制其上皮间质转化过程。