制备保持功能状态的心肌肌浆膜主动性钙泵的实验条件

来源 :国外医学.药学分册 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jxdytmj
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与肌浆膜结合的、ATP酶依赖性钙泵活性,仅在一定的实验条件下方可保持。这些实验条件是:(1)温和的匀浆制作方法。采用剪刀力良好的特殊管子,使匀浆操作时间在4℃时大大缩短;(2)在非连续的蔗糖密度梯度范围内分离肌浆膜期间,有一临界性钙浓度(10~(-5)~3×10~(-5)M。浓度高于3×10~(-7)时,可使自肌浆网分离肌浆膜不完全;浓度低于10~(-7)M(通过加入10~(-4)M的EGTA)时,则钙外流系统的功能状态衰减为零,而肌浆膜蓄积钙的能力仍然完整保留;(3)维持等张性:等比重(Isopyconic)离心和/域贮存于高张溶液中均可破坏肌膜结合钙。在等张性条件下离心5分钟,几乎可保留小囊泡状的肌浆膜。 ATPase-dependent calcium pump activity, which binds to sarcoplasmic reticulum, remains only under certain experimental conditions. These experimental conditions are: (1) mild homogenization production method. Using special tube with good scissors force, the operation time of homogenization was greatly shortened at 4 ℃. (2) During the separation of sarcoplasmic membrane in the discontinuous sucrose density gradient, a critical calcium concentration (10 ~ (-5) ~ 3 × 10 ~ (-5) M. When the concentration is higher than 3 × 10 ~ (-7), the sarcoplasmic membrane can be dissociated from sarcoplasmic reticulum; the concentration is less than 10 ~ (-7) M 10 ~ (-4) M EGTA), then the functional state of the calcium efflux system decays to zero, while the ability of the sarcoplasmic membrane to accumulate calcium remains intact; (3) Isoscones are maintained: Isopyconic centrifugation and / Domain stored in high-tension solution can damage the sarcolemmal calcium. Centrifugation in isotonic conditions for 5 minutes, the vesicle-like sarcoplasmic membrane can be retained almost.
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