【摘 要】
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[目的]由于土壤理化性质的复杂性和真菌细胞壁结构的特殊性,从土壤样品中提取真菌基因组DNA往往比较困难,本实验通过方法优化以寻找适合浙贝母土壤真菌DNA的最佳方法。[方法]
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[目的]由于土壤理化性质的复杂性和真菌细胞壁结构的特殊性,从土壤样品中提取真菌基因组DNA往往比较困难,本实验通过方法优化以寻找适合浙贝母土壤真菌DNA的最佳方法。[方法]分别采用传统玻璃珠法,Ultra CleanTM土壤DNA提取试剂盒法及改进的试剂盒法等3种方法,提取宁波浙贝母种植区的根际土壤微生物总DNA,利用巢式PCR扩增真菌DNA片段。[结果]3种方法均可提取土壤微生物总DNA。其中改进的试剂盒法提取的DNA电泳结果条带最清晰,试剂盒法提取的DNA电泳结果次之,传统玻璃珠法提取的DNA电泳条带不清晰,且有拖尾。对上述三种方法所提取的DNA做巢式PCR分析真菌特异性,传统方法电泳无目的条带,试剂盒法只有第一次PCR电泳有目的条带,只有改进的UltracleanTM土壤DNA提取试剂盒法最终获得了350 bp左右的目的条带,而且利用变性凝胶梯度电泳技术(Denatured gradient gel elec-trophoresis,DGGE)成功地检测到不同种源以及根际与非根际土中微生物的差异。因此认为改进的试剂盒法为提取土壤真菌DNA的最优选择。[结论]在土壤真菌DNA提取中,合适的振荡方法是土壤真菌能否破壁的关键性因素。
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