【摘 要】
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目的 分析表达重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)-Fc融合蛋白的CHO工程细胞的传代稳定性,确定细胞的生产稳定代次.方法 取表达rhGH-fc融合蛋白的CHO细
【机 构】
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长春生物制品研究所有限责任公司,吉林长春130062
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目的 分析表达重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)-Fc融合蛋白的CHO工程细胞的传代稳定性,确定细胞的生产稳定代次.方法 取表达rhGH-fc融合蛋白的CHO细胞(35代),连续传代建立50、70、90代细胞库.复苏各代次细胞并进行培养表达,绘制不同代次的细胞生长曲线,比较不同代次细胞在对数生长期的比生长速率;培养结束,对不同代次细胞表达的蛋白进行亲和层析纯化,比较其表达量,Western blot法对表达蛋白进行鉴定,通过对目的基因mRNA测序比较目的基因的稳定性.结果 50和70代细胞与35代相比,生长曲线基本重合,90代细胞曲线出现差异;50、70、90代细胞在对数生长期的比生长速率与35代相比,差异均无统计学意义(P＞0.05),但90代的P值已明显降低;50和70代细胞重组蛋白表达量与35代相比,差异均无统计学意义(P＞0.05),但90代细胞重组蛋白的表达量下降比例达42％;各代次细胞rhGH-Fc基因序列保持稳定,与理论一致.结论 表达rhGH-Fc融合蛋白的CHO工程细胞的生产稳定代次为70代,可满足后续研究和生产需要.
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