【摘 要】
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新型鹅星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)感染引起的鹅痛风病,是近年严重危害我国养鹅业的传染病之一,给我国养鹅产业造成严重经济损失,快速准确诊断有助于更好地防控该病.为了建立一种鉴定新型GoAstV的一步法RT-PCR方法,根据新型GoAstV ORF2基因序列设计特异性引物,构建质粒标准品,并对引物用量和退火温度等反应体系和条件进行了优化.结果表明,该方法能特异性扩增新型GoAstV 512 bp基因片段,其他鹅常见病毒性病原扩增结果均为阴性,具有较高的特异性.敏感性试验结果提示,
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;江苏省农业科学院兽医研究所/农业
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新型鹅星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)感染引起的鹅痛风病,是近年严重危害我国养鹅业的传染病之一,给我国养鹅产业造成严重经济损失,快速准确诊断有助于更好地防控该病.为了建立一种鉴定新型GoAstV的一步法RT-PCR方法,根据新型GoAstV ORF2基因序列设计特异性引物,构建质粒标准品,并对引物用量和退火温度等反应体系和条件进行了优化.结果表明,该方法能特异性扩增新型GoAstV 512 bp基因片段,其他鹅常见病毒性病原扩增结果均为阴性,具有较高的特异性.敏感性试验结果提示,最小检测限量达4.54×102拷贝/μL.此外,该方法重复性良好,应用所建立的方法对新型GoAstV临床样品进行检测,102份鹅泄殖腔拭子的阳性率为46.08％,24份痛风症状患病鹅内脏样本阳性率为91.70％.本研究建立的新型GoAstV一步法RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,且操作简便、经济、快速,可用于新型GoAstV的临床鉴别诊断和流行病学调查.
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为了给灵芝的生产、驯化及遗传育种提供种质资源,采用酯酶同工酶技术、分子标记技术(ISSR),结合出菇形态学分析了30个野生灵芝菌株的遗传多样性及农艺性状,构建了聚类树状图.酯酶同工酶分析结果表明,当相似系数在0.709时,可以将30个野生灵芝菌株分为7类;ISSR分析结果表明,当相似系数在0.728时,可以将30个菌株分为6类.出菇试验结果表明,30个菌株中有25个菌株能出菇,按形态特征,在欧氏距离为3.92时可将25个灵芝菌株分为五大类群,3种方法存在一致性.通过驯化栽培及农艺性状比较分析筛选出5个产量
为探究快速有效地检测荷花花粉活力的方法,选出适用于大部分荷花花粉萌发的培养基,筛选花粉活力较高的品种,以11份不同资源荷花的花粉为材料,利用离体培养法、I2-KI染色法、2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法对荷花花粉活力进行检测.结果表明,I2-KI染色法和TTC染色法检测得到的花粉染色率均与离体培养得到的萌发率结果不符.易建莲花粉萌发率在5-1培养基(10％PEG 4000、0.02％硼酸、0.1％蔗糖)上最高,为9.86％.野生莲中的泰国莲、越南莲的花粉离体萌发率分别为16.45％、16.67
针对长红枣滴灌新型沼液复合微生物肥过程中存在的问题,通过分析不同水肥供应条件对长红枣生长发育及其质量产量产生的不同作用,研究长红枣优质高效生产的灌水施肥条件,提出新型沼液复合微生物肥合理的灌溉施肥方案.试验以灵武长红枣为试材,采用2因素3水平完全组合式设计方法,试验数据显示,中水中肥和中水高肥处理下叶片叶绿素含量及光合特性总体优于其他处理,产量构成指标也最好,中水高肥处理坐果率为11.24％,中水中肥处理产量高达13882.5 kg/hm2,比低水低肥处理高3199.5 kg/hm2;中水肥条件下利于长红
为对H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)NS1基因进行原核表达,并对表达产物进行抗原性分析,根据NS1基因合成1对特异性引物,进行PCR扩增,将扩增片段连接至PMD18-T载体,通过序列测定和比对筛选出保真基因克隆;将保真基因克隆至pET32a表达载体,构建重组质粒pET32a-NS1后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,加入IPTG进行诱导表达;并对IPTG使用浓度和诱导时间进行优化,对表达的重组蛋白用His-tag镍柱进行纯化,利用Western Blot和免疫荧光技术对纯化的重组蛋白进行鉴定及免疫原性
测定柴胡不同分枝种子的千粒质量、发芽率及简化活力指数等质量指标;利用考马斯亮蓝G-250染色法测定种子可溶性蛋白的含量;蒽酮比色法测定种子可溶性糖、淀粉的含量;紫外吸收法测定种子SOD、POD、CAT酶活性;高效液相色谱法测定种子ABA、IAA、GA3、ZR内源激素含量.结果表明,不同分枝种子的千粒质量、发芽势、发芽率及简化活力指数均差异显著,千粒质量以主茎顶端种子的最高,为1.21 g;发芽势、发芽率及简化活力指数均以一级分枝的最高,分别为34.3％、60.5％、2.01.不同分枝种子的可溶性蛋白、可溶
为研究亲本差异明显的黑麦材料种间杂交F1代农艺性状遗传变异规律及杂种优势,以栽培、野生黑麦种间3个杂交组合的90个F1代单株及其亲本为研究材料,对其11个农艺性状进行杂种优势和关联性分析.结果表明:黑麦种间杂交F1代农艺性状存在丰富的遗传多样性,11个性状的平均变异系数范围为7.00％～38.40％;性状的中亲优势率为-51.77％～24.48％,超亲优势率为-60.59％～19.23％.不同组合性状的杂种优势差异明显;Pearson相关性分析结果显示,11个性状中分别有18、10对的相关性达到极显著(P
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