【摘 要】
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背景:角膜病移植手术面临着角膜供者严重缺乏、术后发生免疫排异反应等诸多问题.在大力倡导角膜捐献的同时,急需找到一种新的替代性的治疗手段.目的:通过优化骨髓间充质干细胞培养条件,探讨转录因子配对盒基因6对骨髓间充质干细胞向角膜缘干细胞样细胞分化的影响.方法:根据细胞形态、成骨成脂分化能力、细胞表面抗原表达鉴定骨髓间充质干细胞及过表达配对盒基因6的骨髓间充质干细胞.按照培养细胞和培养基不同进行分组:对照组(骨髓间充质干细胞+完全培养基)、实验组A(骨髓间充质干细胞+条件培养基)、实验组B(骨髓间充质干细胞+条
【机 构】
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贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室,贵州省贵阳市 550025
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背景:角膜病移植手术面临着角膜供者严重缺乏、术后发生免疫排异反应等诸多问题.在大力倡导角膜捐献的同时,急需找到一种新的替代性的治疗手段.目的:通过优化骨髓间充质干细胞培养条件,探讨转录因子配对盒基因6对骨髓间充质干细胞向角膜缘干细胞样细胞分化的影响.方法:根据细胞形态、成骨成脂分化能力、细胞表面抗原表达鉴定骨髓间充质干细胞及过表达配对盒基因6的骨髓间充质干细胞.按照培养细胞和培养基不同进行分组:对照组(骨髓间充质干细胞+完全培养基)、实验组A(骨髓间充质干细胞+条件培养基)、实验组B(骨髓间充质干细胞+条件培养基+细胞因子)、实验组C(过表达配对盒基因6的骨髓间充质干细胞+条件培养基+细胞因子).诱导5,10 d时采用免疫荧光、流式细胞术检测p63、k14和k12的表达,流式细胞术检测细胞增殖指标Ki-67的表达和细胞凋亡率,Western blot法和RT-PCR法检测配对盒基因6的蛋白和mRNA表达.结果 与结论:①诱导培养前,两组细胞均具有骨髓间充质干细胞的特性.②诱导培养后,均出现球型或卵圆形的细胞,呈悬浮生长.4组细胞的角膜缘干细胞样细胞特异性分子p63、k14表达阳性,实验组荧光表达量高于对照组(P<0.05),而角膜上皮分子k12表达阴性.随着培养条件的优化,实验组C的细胞增殖更明显,凋亡细胞更少.诱导5 d时,实验各组配对盒基因6的蛋白及mRNA表达量呈递增变化.③结果 表明,条件培养基联合细胞因子诱导可加快骨髓间充质干细胞向角膜缘干细胞样细胞分化.过表达配对盒基因6的骨髓间充质干细胞向角膜缘干细胞样细胞定向分化的速度和比例更具有优越性,且其能促进细胞增殖、抑制细胞凋亡.
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