HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

• 作 者: 刘纪玉 杜以军 刘星 吴家强 李俊 丛晓燕 赵新华 徐绍建
• 机 构: 青岛农业大学,山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,山东省农业科学院畜牧兽医研究所
• 出 处: 中国畜牧兽医
• 发表日期: 2013年5期
• 关键词: 实时荧光定量RT-PCR SYBR GreenⅠ 口蹄疫病毒 L蛋白 干扰素 Real-time fluorescent quantitative RT-PCR
• 基金项目: 国家自然科学基金（31100119、31170146）, 青岛市科技基金（11-2-3-24-nsh）, 山东省生猪产业创新团队建设, 公益性行业（农业）科研专项经费（201303046）, 山东省优秀中青年科学家科研奖励基金（BS2012NY012）

本试验旨在建立一种用SYBR GreenⅠ荧光染料检测HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子ISG15、ISG56、Mx1、OAS和PKR mRNA表达水平的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并在口蹄疫病毒（FMDV）L蛋白抑制Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路中进行初步应用。利用TRIzol法提取总RNA,经Oligo d（T）15进行反转录,利用PCR扩增各段目的基因,并克隆至pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,经鉴定为阳性的重组质粒作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR标准曲线和熔解曲