【摘 要】
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目的观察人热休克蛋白72(HSP72)基因体外转染人脂肪间充质干细胞(ASCs)及其HSP72表达情况。方法通过腹部取皮术获得的皮下脂肪利用胶原酶消化法进行体外分离培养,体外扩增至
【机 构】
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湖南师范大学第一附属医院皮肤科,第四军医大学西京医院全军整形外科研究所,湖南师范大学第一附属医院整形美容科,湖南师范大学第一附属医院病理科
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目的观察人热休克蛋白72(HSP72)基因体外转染人脂肪间充质干细胞(ASCs)及其HSP72表达情况。方法通过腹部取皮术获得的皮下脂肪利用胶原酶消化法进行体外分离培养,体外扩增至第3代,用腺病毒载体系统将人源性HSP72转染至第3代ASCs,在倒置荧光显微镜下观察转染后的细胞形态和生长变化,应用实时荧光定量PCR、Western blot法鉴定HSP72在ASCs中的表达。结果皮下脂肪经消化,体外培养可获得ASCs P3代;ASCs转染24 h后,绿色荧光蛋白表达明显增强。经实时荧光定量PCR证实转基因ASCs表达HSP72m RNA在24 h后逐渐增强。Western blot检测证实转基因ASCs在24 h后出现特征条带,而空白组未出现条带。结论采用腺病毒介导的基因转染技术可将HSP72基因转染至ASCs中,并可以在HSP72m RNA和蛋白中有效表达,ASCs可以作为HSP72基因治疗的载体。
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