【摘 要】
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为探索TB27.4蛋白在牛结核病鉴别诊断中的作用,本试验以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板,PCR扩增tb27.4全长基因片段,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a（＋）中,构建重组质
【机 构】
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中国农业科学院研究生院,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
【基金项目】
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中国农业科学院科技创新工程（ASTIP-IAS-11）, 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目（2014ywf-zd-1）
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为探索TB27.4蛋白在牛结核病鉴别诊断中的作用,本试验以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板,PCR扩增tb27.4全长基因片段,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a（＋）中,构建重组质粒pET-TB27.4,优化原核表达条件,并用AKTA Purifier对蛋白的纯化条件进行优化。SDS-PAGE结果显示重组蛋白为可溶性表达,且大小与理论值相符,用牛分枝杆菌阳性血清进行Western blotting检测有特异性条带,且可特异性地刺激牛分枝杆菌感染牛外周血淋巴细胞释放大量IFN-γ。结果表
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