【摘 要】
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目的:采用细菌内同源重组法构建含人内皮抑素基因的重组腺病毒Ad-CMV-hEn.方法:将hEn基因自pCA13-hEn质粒中酶切下来,亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成转移质粒pAdtrack-CMV-hE
【机 构】
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复旦大学附属中山医院普外科,上海交通大学生命科学技术学院,中国科学院上海生命科学研究院
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目的:采用细菌内同源重组法构建含人内皮抑素基因的重组腺病毒Ad-CMV-hEn.方法:将hEn基因自pCA13-hEn质粒中酶切下来,亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成转移质粒pAdtrack-CMV-hEn,并用PmeⅠ线性化后与腺病毒基因组质粒pAdeasy共转化大肠杆菌BJ5183,抽提重组体腺病毒基因组质粒DNA,PacⅠ酶切后在293细胞中包装成腺病毒颗粒.采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定,同时测定了病毒滴度.并采用RT-PCR检测感染腺病毒的胃癌细胞内有无hEn mRNA的转录.结果:由pAd
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