【摘 要】
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目的 基于Wnt信号通路探究表没食子酸儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对人肝星状细胞LX-2活化的影响及其作用机制.方法 体外培养LX-2细胞,CCK-8法筛选EGCG的实验浓度;取对数生长期的LX-2细胞,设置对照组(正常培养)、模型组[10ng/mL转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)]、EGCG低剂量组(12.5μmol/L EGCG+ 10 ng/mL TGF-β1)、EGCG高齐量组(25.0
【机 构】
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河南大学第一附属医院普外一科,河南开封475000
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目的 基于Wnt信号通路探究表没食子酸儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对人肝星状细胞LX-2活化的影响及其作用机制.方法 体外培养LX-2细胞,CCK-8法筛选EGCG的实验浓度;取对数生长期的LX-2细胞,设置对照组(正常培养)、模型组[10ng/mL转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)]、EGCG低剂量组(12.5μmol/L EGCG+ 10 ng/mL TGF-β1)、EGCG高齐量组(25.0 μmol/L EGCG+ 10 ng/mL TGF-β1)、EGCG+siRNA-NC组[小窝蛋白-1(Caveolin-1,Cav-1)-siRNA阴性对照+25.0 μmol/L EGCG+TGF-β1]和EGCG+ Cav-1-siRNA组(Cav-1-siRNA+25.0μmol/L EGCG+TGF-β1),CCK-8法检测各组细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布情况;吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色法观察细胞凋亡形态;qRT-PCR法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitors of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1)mRNA表达情况;Western blotting检测细胞Cav-1和Wnt信号通路相关蛋白表达情况.结果 EGCG降低LX-2细胞存活率,呈剂量相关性.与对照组相比,模型组LX-2细胞存活率、S期和G2/M期的细胞比例、细胞α-SMA、Collagen Ⅰ、TIMP-Ⅰ mRNA表达和Wntl、Wnt5a、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白Cyclin D1、原癌基因c-Myc蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05),细胞凋亡率、G0/G1期的细胞比例、凋亡细胞比例、Cav-1蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05);与模型组相比,EGCG低、高剂量组LX-2细胞存活率、S期和G2/M期的细胞比例、细胞α-SMA、Collagen Ⅰ、TIMP-1 mRNA表达和Wnt1、Wnt5a、β-catenin、Cyclin D1、c-Myc蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05),细胞凋亡率、G0/G1期的细胞比例、凋亡细胞比例、Cav-1蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05);且在EGCG干预的基础上,沉默Cav-1的表达可显著上调Wnt1、Wnt5a蛋白表达,减弱EGCG对Wnt信号通路的抑制作用.结论 EGCG可能通过上调Cav-1表达,抑制Wnt信号通路激活,进而抑制LX-2细胞活化.
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