猪食欲肽受体2激动剂细胞筛选模型的建立及对天然中药提取物受体激动剂的筛选

• 作 者: 崔子鹤 张海洁 蔺帅 姜军娜 肖霞 刘源 王志强
• 机 构: 扬州大学兽医学院,扬州大学
• 出 处: 中国畜牧兽医
• 发表日期: 2020年2期
• 关键词: 猪 食欲肽受体2(pOX2R) 萤火虫荧光素酶 天然中药材 筛选 pigOrexin-2 receptor(pOX2R)firefly luciferasetr
• 基金项目: 国家自然科学基金项目(31872526),江苏高校优势学科建设工程项目(PAPD),扬州市国际科技合作项目(YZ2018155)

本研究旨在构建猪食欲肽受体2(pOX2R)的真核表达载体,探究其对天然中药提取物的药理学活性。将成功构建的pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R和报告质粒PGL4.29[luc2p/CRE/Hygro]分别瞬时转染HEK293T细胞,利用萤火虫荧光素酶报告基因检测法测定阳性细胞株在不同浓度激动剂Orexin A和Orexin B以及颉颃剂TCS作用下胞内cAMP水平。将目的质粒与报告质粒稳定共转染CHO-K1细胞,利用G418和潮霉素B进行抗性筛选,获得6株阳性细胞株和5株阴性细胞株。对具有促进食欲作