MEKK2基因siRNA重组腺病毒表达载体的构建及其对MEKK2的表达抑制

• 作 者: 钱凤英 兰风华 董荔红 黄俏佳
• 机 构: 南京军区福州总医院分子医学研究中心
• 出 处: 中国细胞生物学学报
• 发表日期: 2012年3期
• 关键词: 腺病毒载体 RNA干扰 MEKK2基因 H2O2 细胞凋亡 adenovirus vector RNA interference MEKK2 gene H
• 基金项目: 福建省自然科学基金（No.2009J01181）, 南京军区医药卫生科研基金（No.08MA100）, 南京军区福州总医院专项基金（（No.2004037）资助项目

设计并合成针对人MEKK2基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,将合成的互补片段退火后克隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭载体中,并使其在大肠杆菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组。将经鉴定正确的重组腺病毒质粒转染293A细胞,包装得到具有感染能力的pAd-MEKK2-siRNA重组腺病毒。病毒体外转导人胃腺癌AGS细胞,Western blot印迹法检测其对MEKK2表达的抑制。经酶切和测序鉴定均证实pAd-MEKK2-siRNA重组腺病毒载体构建成功,其插入序