【摘 要】
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目的:构建炭疽芽孢杆菌新抗原NlpC的原核表达质粒,制备NlpC重组蛋白并进行免疫评价,为新型炭疽亚单位疫苗研发提供参考.方法:运用生物信息学软件分析和预测NlpC蛋白的跨膜区
【机 构】
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军事医学研究院 生物工程研究所,北京 100071
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目的:构建炭疽芽孢杆菌新抗原NlpC的原核表达质粒,制备NlpC重组蛋白并进行免疫评价,为新型炭疽亚单位疫苗研发提供参考.方法:运用生物信息学软件分析和预测NlpC蛋白的跨膜区、信号肽、疏水性、保守性等性质;PCR扩增nlpc基因片段,构建NlpC原核表达质粒,IPTG诱导表达,His亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE与Western印迹鉴定纯化的蛋白;NlpC重组蛋白联合佐剂免疫小鼠后,ELISA法检测免疫血清的抗体效价,体外实验检测免疫血清抑制芽孢萌发功能,BALB/c小鼠免疫攻毒实验评价免疫保护效果.结果:生物信息学分析结果表明NlpC有信号肽,无跨膜区,亲水性好,具有较高的保守性;构建了NlpC原核表达质粒,经诱导表达与纯化获得了纯度高于95％的NlpC蛋白;免疫评价结果显示NlpC联合Al(OH)3+CpG佐剂可激发小鼠产生高水平的抗体反应,NlpC免疫血清可在体外抑制炭疽芽孢萌发,NlpC免疫组可显著延长炭疽杆菌芽孢攻毒后小鼠存活时间.结论:NlpC具有较好的免疫原性,是潜在的炭疽杆菌保护性抗原,可作为新型炭疽亚单位疫苗的候选组分.
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