【摘 要】
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目的探索一种不依赖于病毒培养,直接对临床样本中未知核糖核酸(Ribonucleic Acid,RNA)病毒作出鉴定的分子生物学方法。方法对经前处理后的临床样本提取病毒RNA,进行随机聚合
【机 构】
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温州医学院检验医学院暨生命科学院; 浙江省疾病预防控制中心;
【基金项目】
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浙江省公共卫生检验检测重点学科群(XKQ-009-003)
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目的探索一种不依赖于病毒培养,直接对临床样本中未知核糖核酸(Ribonucleic Acid,RNA)病毒作出鉴定的分子生物学方法。方法对经前处理后的临床样本提取病毒RNA,进行随机聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增,通过对扩增产物的纯化、克隆、测序以及序列的在线比对,根据同源性确定核酸片段的来源,并最终实现对未知病毒的鉴定。对临床样本的前处理以及前处理方法的优化,即通过冻融、离心、过滤、聚乙二醇浓缩,以及核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶的处理,尽可能地去除样本中的无关核酸,以增大病毒核酸在样本中所占比例,提高阳性检出率。结果通过对样本前处理方法的改进,从病毒载量为4.8×103Copy/ml(拷贝/毫升)的含漱液样本中,以70%的阳性克隆率检测出未知RNA病毒。结论所建立的方法能提高对RNA病毒鉴定的阳性率,这将在不明原因传染病病原体的鉴别诊断中,发挥重要的作用。
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